Kontaminering av cellkulturer kan lätt bli det vanligaste problemet i cellodlingslaboratorier, vilket ibland orsakar mycket allvarliga konsekvenser.Cellkulturföroreningar kan delas in i två kategorier, kemiska föroreningar som medium-, serum- och vattenföroreningar, endotoxiner, mjukgörare och rengöringsmedel, och biologiska föroreningar som bakterier, mögel, jästsvampar, virus, korsinfektion av mykoplasma.Förorenad av andra cellinjer.Även om det är omöjligt att helt eliminera kontaminering, kan dess frekvens och svårighetsgrad minskas genom att noggrant förstå dess källa och följa goda aseptiska tekniker
1. Detta avsnitt beskriver huvudtyperna av biologisk kontaminering:
Bakteriell kontaminering
Mögel och viruskontamination
Mykoplasmakontamination
Jästförorening
1.1 Bakteriell kontaminering
Bakterier är en stor grupp av allestädes närvarande encelliga mikroorganismer.De är vanligtvis bara några mikrometer i diameter och kan komma i en mängd olika former, från sfärer till stavar och spiraler.På grund av deras allestädes närvarande, storlek och snabba tillväxthastighet är bakterier, tillsammans med jästsvampar och mögel, de vanligaste biologiska föroreningarna i cellkultur.
1.1.1 Detektering av bakteriell kontaminering
Bakteriell kontaminering kan lätt upptäckas genom visuell inspektion av kulturen inom några dagar efter att den blivit infekterad;
Infekterade kulturer verkar vanligtvis grumliga (dvs grumliga), ibland med en tunn hinna på ytan.
Plötsliga fall i odlingsmediets pH förekommer också ofta.
Under ett lågeffektmikroskop framstår bakterierna som små, rörliga granuler mellan cellerna, och observation under ett högeffektmikroskop kan lösa formerna hos enskilda bakterier.
1.2 Mögel- och viruskontamination
1.2.1 Mögelförorening
Mögelsvampar är eukaryota mikroorganismer i svampriket som växer i form av flercelliga filament som kallas hyfer.De sammanbindande nätverken av dessa flercelliga filament innehåller genetiskt identiska kärnor som kallas kolonier eller mycel.
I likhet med jästkontamination förblir kulturens pH stabilt under den inledande fasen av kontamineringen och ökar sedan snabbt när kulturen blir allvarligare infekterad och blir grumlig.Under mikroskopet är mycelet vanligtvis filamentöst, ibland som täta kluster av sporer.Sporerna från många mögelsvampar kan överleva i extremt hårda och ogästvänliga miljöer under sin vilande fas och aktiveras endast när de rätta tillväxtförhållandena uppstår.
1.2.2 Viruskontamination
Virus är mikroskopiska smittämnen som tar över värdcellens maskineri för reproduktion.Deras extremt ringa storlek gör dem svåra att upptäcka i odling och att ta bort från reagenser som används i cellodlingslaboratorier.Eftersom de flesta virus har mycket strikta krav på sina värdar, påverkar de vanligtvis inte cellkulturer av andra arter än värden negativt.
Användningen av virusinfekterade cellkulturer kan dock utgöra en allvarlig risk för laboratoriepersonalens hälsa, särskilt om mänskliga eller primatceller odlas i laboratoriet.
Virusinfektion i cellkulturer kan detekteras genom elektronmikroskopi, immunfärgning med en uppsättning antikroppar, ELISA eller PCR med lämpliga virala primers.
1.3 Mykoplasmakontamination
Mykoplasma är enkla bakterier utan cellväggar, och de tros vara de minsta självreplikerande organismerna.På grund av deras extremt lilla storlek (vanligtvis mindre än 1 mikron) är mykoplasma svårt att upptäcka tills de når extremt höga densiteter och gör att cellkulturer försämras;Tills dess finns det vanligtvis inga tydliga tecken på infektion.
1.3.1 Detektering av mykoplasmakontamination
Vissa långsamväxande mykoplasmer kan kvarstå i kulturer utan att orsaka celldöd, men de förändrar beteendet och metabolismen hos värdceller i kulturer.
Kronisk mykoplasmainfektion kan kännetecknas av minskad cellproliferationshastighet, minskad mättnadstäthet och agglutination i suspensionskultur.
Det enda tillförlitliga sättet att upptäcka mykoplasmakontamination är dock att testa kulturen regelbundet med fluorescerande färgning (t.ex. Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunfärgning, autoradiografi eller mikrobiell testning.
1.4 Jästkontamination
Jäst är encelliga eukaryoter i svampriket, i storlek från några mikrometer (vanligtvis) till 40 mikrometer (sällan).
1.4.1Detektering av jästkontamination
Precis som med bakteriell kontaminering kan kulturer som är förorenade med jäst bli grumliga, särskilt om kontamineringen är i ett framskridet stadium.pH-värdet i kulturer som är förorenade med jäst förändras mycket lite tills kontamineringen blir allvarligare, då pH-värdet vanligtvis ökar.Under mikroskopet uppträder jäst som individuella äggformade eller sfäriska partiklar och kan producera mindre partiklar.
2.Korsinfektion
Även om det inte är lika vanligt som mikrobiell kontaminering, är omfattande korskontaminering av många cellinjer med HeLa och andra snabbväxande cellinjer ett klart definierat problem med allvarliga konsekvenser.Skaffa cellinjer från välrenommerade cellbanker, kontrollera regelbundet cellinjernas egenskaper och använd bra aseptiska tekniker.Dessa metoder hjälper dig att undvika korskontaminering.DNA-fingeravtryck, karyotypning och isotypning kan bekräfta om det finns korskontaminering i din cellkultur.
Även om det inte är lika vanligt som mikrobiell kontaminering, är omfattande korskontaminering av många cellinjer med HeLa och andra snabbväxande cellinjer ett klart definierat problem med allvarliga konsekvenser.Skaffa cellinjer från välrenommerade cellbanker, kontrollera regelbundet cellinjernas egenskaper och använd bra aseptiska tekniker.Dessa metoder hjälper dig att undvika korskontaminering.DNA-fingeravtryck, karyotypning och isotypning kan bekräfta om det finns korskontaminering i din cellkultur.
Posttid: 2023-01-01