1.Vad är cellkultur?
Cellkultur avser att ta bort celler från djur eller växter och sedan odla dem i en gynnsam artificiell miljö.Cellerna kan tas direkt från vävnaden och brytas ned på enzymatiska eller mekaniska sätt före odling, eller så kan de härröra från etablerade cellinjer eller cellinjer.
2.Vad är primärkultur?
Primärkultur hänvisar till odlingsstadiet efter att celler separerats från vävnaden och förökat sig under lämpliga förhållanden tills de upptar alla tillgängliga substrat (det vill säga når sammanflödet).I detta skede måste cellerna subodlas genom att överföra dem till en ny behållare med färskt tillväxtmedium för att ge mer utrymme för fortsatt tillväxt.
2.1 Celllinje
Efter den första subkulturen kallas den primära kulturen en cellinje eller subklon.Cellinjer som härrör från primärkulturer har en begränsad livslängd (dvs. de är begränsade; se nedan), och när de passerar dominerar cellerna med den högsta tillväxtkapaciteten, vilket resulterar i en viss grad av genotyp i populationen med fenotyp.
2.2 Cellstam
Om en subpopulation av en cellinje selekteras positivt från kulturen genom kloning eller någon annan metod, skulle cellinjen bli en cellstam.Cellstammar förvärvar vanligtvis ytterligare genetiska förändringar efter att föräldralinjen startar.
3.Begränsade och kontinuerliga cellinjer
Normala celler delar sig vanligtvis endast ett begränsat antal gånger innan de förlorar förmågan att föröka sig.Detta är en genetiskt bestämd händelse som kallas senescens;dessa cellinjer kallas ändliga cellinjer.Men vissa cellinjer blir odödliga genom en process som kallas transformation, som kan ske spontant eller kan induceras av kemikalier eller virus.När en ändlig cellinje genomgår transformation och får förmågan att dela sig på obestämd tid, blir den en kontinuerlig cellinje.
4. Kulturens tillstånd
Odlingsförhållandena för varje celltyp är mycket olika, men den konstgjorda miljön för att odla celler är alltid sammansatt av en lämplig behållare, som innehåller följande:
4.1 Substrat eller odlingsmedium som ger viktiga näringsämnen (aminosyror, kolhydrater, vitaminer, mineraler)
4.2 Tillväxtfaktorer
4.3 Hormoner
4.4 Gaser (O2, CO2)
4.5 Reglerad fysisk och kemisk miljö (pH, osmotiskt tryck, temperatur)
De flesta celler är förankringsberoende och måste odlas på ett fast eller halvfast substrat (vidhäftande eller monolagerkultur), medan andra celler kan växa flytande i mediet (suspensionskultur).
5. Kryokonservering
Om det finns överskott av celler i subkulturen ska de behandlas med ett lämpligt skyddsmedel (som DMSO eller glycerol) och förvaras vid en temperatur under -130°C (kryokonservering) tills de behövs.För mer information om subkultur och kryokonservering av celler.
6. Morfologi av celler i kultur
Celler i kultur kan delas in i tre grundläggande kategorier baserat på deras form och utseende (dvs. morfologi).
6.1 Fibroblastceller är bipolära eller multipolära, har en långsträckt form och växer fast vid substratet.
6.2 Epitelliknande celler är polygonala, har en mer regelbunden storlek och är fästa vid matrisen i diskreta ark.
6.3 Lymfoblastliknande celler är sfäriska och växer vanligtvis i suspension utan att fästa på ytan.
7. Applicering av cellkultur
Cellkultur är ett av de viktigaste verktygen som används inom cell- och molekylärbiologi.Det ger ett utmärkt modellsystem för att studera cellers normala fysiologi och biokemi (såsom metabolisk forskning, åldrande), effekterna av läkemedel och toxiska föreningar på celler samt mutagenes och cancerframkallande effekter.Det används också för läkemedelsscreening och utveckling och storskalig tillverkning av biologiska föreningar (som vacciner, terapeutiska proteiner).Den största fördelen med att använda cellkultur för någon av dessa applikationer är konsistensen och reproducerbarheten hos de resultat som kan erhållas med en sats av klonade celler.
Posttid: 2019-03-03